Kürzlich ist bei einigen Benutzern einer Person bei der Problemlösung von Bradford Protein Assays ein Fehlercode aufgetreten. Dieses Problem kann aus mehreren Gründen auftreten. Wir werden sie unten behandeln.
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Chemie zum BCA-Protein-Assay 15 Vorteile des BCA-Protein-Assays 16 Nachteile des BCA-Protein-Assays 16 BCA-Protein-Assay – Reduzierer-Kompatibilität 18 BCA-Protein-Assay 19 Mikro-BCA-Protein-Assay grob Coomassie Dye Protein Assay (Bradford Assay) 21
Die Aufnahme der Proteinprobe ist jetzt geringer als erwartet
Nehmen Sie eine gesunde Proteinprobe höher auf als erwartet
Aufnahme aller unserer Standards unter den Erwartungen
Proben können dunkelblau sein
Niederschlagsmenge in der Probe
Experimentieren Sie mit Proteinen, die störende Substanzen enthalten:
Hinweis. Dies ist ohne Zweifel keine erschöpfende und erschöpfende Liste gut geeigneter Stoffe und ihrer einzelnen Konzentrationen. Es gibt viele Substanzen, die mit Proteinen in verschiedene Richtungen interagieren. Reagenzien können den pH-Wert des Versuchs verändern, was die korrekte Leistung des jeweiligen Bradford-Tests beeinträchtigt.
Technischer Rat
Der Bradford Protein Assay ist eine einfache und einfache Möglichkeit, die Proteinkonzentration bei Bedarf zu quantifizieren, aber es kann eine regelmäßige Fehlerbehebung erforderlich sein.
Der Farbstoff bindet sowohl an basische als auch an aromatische Aminosäuren, was zu einer Änderung der Aufnahme führt. Es ist leicht an seiner Farbvariation von braun bis blau zu erkennen. Ihr Proteinkonzentrat kann anhand von Standardproteinen, hauptsächlich BSA (Rinderserumalbumin), bestimmt werden.
Faktoren wie; Hitze, Wellenlänge, Reinigungsmittel und sogar gebrauchte Fancy-Küvetten können die Statistik beeinflussen und falsche Ergebnisse liefern. Wenn Sie weiterhin einige dieser Probleme haben, machen Sie sich keine Sorgen! Diese Anleitung zur Fehlerbehebung von ZAGENO hilft Ihnen dabei!
Nachfolgend finden Sie eine Zusammenfassung der typischen medizinischen Probleme, die bei der Durchführung des Bradford Amino Assay-Tests auftreten.
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Niedriges Molekulargewicht: Die Nachweisgrenze für unseren eigenen Bradford-Test liegt bei 3.000 bis 5.000 Dalton. Wenn das Protein nicht ganz so ist, verwenden Sie beispielsweise eine andere Quantifizierungsmethode. Tabelle 1). Verdünnen Sie die Proteinprobe. Stellen Sie sicher, dass Ihre persönlichen Standards im gleichen Puffer verdünnt werden.
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Sie haben eine sehr hohe Proteinkonzentration. Verdünnen Sie das Proteinbeispiel und messen Sie die Proteinkonzentration erneut.
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Störstoffe: In der Praxis werden chemische Störstoffe wie Flüssigkeiten eingeschlossen (Tabelle 1). Verdünnen Sie die Proteinprobe. Stellen Sie sicher, dass Ihre Standards mit Sicherheit mit dem gleichen Puffer verdünnt werden.
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Farbige Reagenzien sind zu alt, nicht richtig gelagert: Bradfords Reagenz hat eine Standzeit von etwa 12 Mal pro Jahr. Wenn es alt wird, ersetzen Sie es durch rasshsteril und lagern Sie es daher bei 4 ° C.
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Standardverdünnungen statt richtig zubereitet: Versuchen Sie es mit den Anweisungen des Herstellers, die dem Protokoll beiliegen, das Ihre Standardproteinverdünnungen.
Genehmigt: Fortect
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- 1. Laden Sie Fortect herunter und installieren Sie es auf Ihrem Computer
- 2. Starten Sie das Programm und klicken Sie auf "Scannen"
- 3. Klicken Sie auf "Reparieren", um alle gefundenen Probleme zu beheben
Farbstoffreagenz zu kalt: Bringen Sie Bradfords Reagenz vor Beginn der Analyse auf Raumtemperatur.Absorption bei falscher Wellenlänge: Messen Sie die Gesamtabsorption bei 595 nm.
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Hohe alkalische Konzentrationen: Dies erhöht den pH-Vorteil über den Grenzwert des Bradford-Reagenzes. Probe verdünnen oder dialysieren
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Detergenzien während der Proteinpufferung: Dialysieren Sie die erforderliche Praxis oder verdünnen Sie sie, um diese spezielle Menge an Detergens zu reduzieren.
Störende Substanzen an Ladung 1 sind eine der Hauptüberlegungen bei der Durchführung des Bradford-Tests. Tabelle 1 erstellt eine Liste der am häufigsten verwendeten chemischen Verbindungen und ihrer zulässigen Konzentrationen. Die beschriebenen Informationen entnehmen Sie bitte dem Standardprotokoll des jeweiligen Herstellers. Wenn ein von Ihnen eingenommener Stoff als mit der Konzentration unvereinbar oder überhaupt nicht berechnet angesehen wird, siehe Abteilung unten.
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Die Konzentration der störenden Substanz stimmt nicht mit dem Bradford-Test überein: Wenn Sie einen hohen Proteinfokus haben, verdünnen Sie die Probe bis zu dem Punkt, an dem keine Störung mehr auftritt, oder entfernen Sie die Verbindung auf Dialyse
Die Substanz ist möglicherweise nicht in der Reagenzkompatibilitätsliste enthalten: Führen Sie zwei Standardkonformitäten durch, eine mit dem besten Protein in Ihrem Hindernis, die andere mit Ihrem eigenen Protein in der Flüssigkeit, und zeichnen Sie die Proteinkonzentration gegenüber der Absorption. Wenn die tatsächliche Unterlegscheibe die Größe Ihres Unternehmens nicht beeinträchtigt, würde ich sagen, dass die beiden Standardformen die gleiche Neigung haben.
Tabelle 1. Konzentrationen kompatibler Stoffe im Bradford-Typ-Test (2012))
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Das Farbreagenz kann mit Quarzküvetten arbeiten; Es wird als am besten angesehen, Küvetten aus Glas oder Kunststoff zu verwenden.
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Schmutz auf dem Glas kann Ihre Messungen beeinträchtigen, daher müssen Sie es natürlich vor dem Gebrauch reinigen.
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Die Temperatur des Bradford-Reagenz muss mit der Temperatur in der Kabine übereinstimmen
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– Zwei potenzielle Probleme bei der Bradford-Forschung sind, dass der Test oft nur für größere Proteine robust ist und die Probe etwas mehr innerhalb eines bestimmten Temperatur- und pH-Bereichs liegen muss. Proben, die die erforderlichen Proteine unter 3000-5000 Dalton enthalten, sind aufgrund der zu geringen Absorption zweifellos schwer abzulesen.
Im Gegensatz zu anderen Gesundheitstests ist der Bradford-Proteintest nicht ganz so empfindlich gegenüber den Auswirkungen verschiedener chemischer Erhöhungen wie Natrium, Kalium oder sogar kohlenhydratähnlicher Saccharose, die in den für Protein erwarteten Mengen vorhanden sein können. Ausnahmen sind zu hohe Konzentrationen der meisten Reinigungsmittel.
Mehrere Konzentrationen jeder unserer unbekannten Hauptproben können verwendet werden, um die Genauigkeit zu verringern. Geben Sie 100 µl verdünntes Bradford-Reagenz in alle Wells. Die Gesamtinflation beträgt 250 μl / Vertiefung. Warten Sie mindestens signifikante Minuten, nicht länger als 60 Minuten, bis sich das Pigment entwickelt hat.
