Recientemente, algunos de nuestros usuarios encontraron un código de error al solucionar problemas de los ensayos de proteínas Bradford. Este problema puede surgir para varios grandes. Los cubriremos a continuación.
Química del ensayo de proteínas BCA 15 Beneficios del ensayo de proteínas BCA 14 Desventajas del ensayo de proteínas BCA 17 Ensayo de proteínas BCA – Compatibilidad con reductores 18 Ensayo de proteínas BCA 19 Ensayo de proteínas micro BCA 20 Ensayo de proteínas con colorante Coomassie (ensayo de Bradford) 21
La absorción de la muestra de proteína ahora es menor de lo esperado
Absorber una muestra de proteína saludable más alta de lo esperado
Absorción de cada uno de nuestros estándares por debajo de lo esperado
Las muestras pueden ser azul oscuro
Cantidad de precipitación en la muestra
Experimente con proteínas que contienen sustancias que interfieren:
Nota. Esta no es una especie de lista exhaustiva y exhaustiva de sustancias compatibles y, como consecuencia, sus concentraciones individuales. Hay muchas sustancias que interactúan con las proteínas de diferentes formas. Los reactivos deben alterar el pH de la prueba, lo que muy bien podría afectar el desempeño correcto de la investigación de Bradford.
Asesoramiento técnico
El ensayo de proteínas de Bradford es una forma sencilla y fácil de conocer la concentración de proteínas si es necesario, pero a veces se puede requerir fácilmente la resolución de problemas.
El tinte se une a los aminoácidos básicos y salados, lo que provoca un cambio en la absorción. Probablemente se reconozca fácilmente por su cambio de color de gris a azul. Su concentrado de proteínas se puede confirmar utilizando proteínas estándar, principalmente BSA (albúmina en solución bovina).
factores como; El calor, la longitud de onda, los limpiadores e incluso las cubetas de fantasía usadas pueden influir en las estadísticas además de dar resultados incorrectos. Si tiene algunos de estos problemas, ¡no se preocupe! ¡Esta guía de resolución de problemas de ZAGENO le ayudará!
A continuación, encontrará un resumen de los problemas típicos que se encuentran cada vez que realiza la prueba de ensayo de aminoácidos de Bradford.
Bajo peso molecular: el límite de detección para lograr nuestra propia prueba de Bradford es de 3000 a 5000 daltons. Si la proteína es menor, utilice un método de cuantificación funcional diferente, por ejemplo. Tabla 1). Diluir la muestra de proteína. Asegúrese de que sus estándares se diluyan con toda seguridad en el mismo tampón.
Tiene una atención increíblemente alta a las proteínas. Diluya la muestra de proteína y compare bien la concentración de proteína nuevamente.
Sustancias interferentes: En la práctica, se incluyen sustancias interferentes como líquidos (Tabla 1). Diluir la muestra de proteína. Asegúrese de que sus estándares estén suficientemente diluidos para el mismo tampón.
Los reactivos de color son demasiado antiguos, no se registran correctamente: el reactivo de Bradford tiene una vida útil que incluye aproximadamente 12 veces al año. Cuando entre en contacto con el viejo, reemplácelo con rasshsterile y guárdelo a 4 ° C.
Diluciones estándar en lugar de preparadas adecuadamente: siga las instrucciones del auto que acompañan al protocolo que crea nuestras diluciones de proteínas estándar.
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3. Haga clic en "Reparar" para solucionar cualquier problema que se encuentre
Reactivo de tinte demasiado frío: Traiga el reactivo de Bradford para ayudar a la temperatura ambiente antes de comenzar el análisis.Absorbancia medida a una longitud de onda incorrecta: Mida la absorbancia total ubicada a 595 nm.
Altas concentraciones alcalinas: esto aumenta el valor de pH por encima del valor límite real del reactivo de Bradford. Diluir o tal vez una muestra de dializado
Detergentes durante el tampón de proteínas: dialice la muestra requerida o disminuya para reducir este nivel particular de jabón de limpieza.
Las sustancias que interfieren a cargo dos son uno de los principales problemas cuando se trabaja en la prueba de Bradford. La Tabla 1 proporciona un registro de las sustancias más comúnmente utilizadas y sus concentraciones permitidas. Consulte el protocolo establecido por el fabricante para obtener la información descrita. Si la profundidad que está tomando se considera incompatible con la concentración además de que no se calcula en absoluto, consulte la sección siguiente.
La concentración de yo diría que la sustancia interferente no coincide con la prueba de Bradford: obviamente, si tiene una alta concentración de proteína, diluya su muestra actual hasta el punto en que no haya más interferencia, o eliminar la sustancia con respecto a la diálisis
Es posible que la sustancia no esté en toda la lista de compatibilidad de reactivos: ejecute dos curvas estándar, una cuando se trata de la mejor proteína en su tampón y la otra con su propia proteína en el agua y en la tierra la concentración de proteína frente a la absorción. Si la cuña real no interfiere con su tamaño, diría que las dos curvas estándar tienen la misma pendiente.
Tabla 1. Concentraciones de sustancias compatibles en la evaluación Bradford-Type (2012))
El reactivo de tinte definitivamente funcionará con cubetas de cuarzo; Es mejor utilizar cubetas de vidrio o plástico.
La suciedad en la cristalería puede afectar las mejores medidas, por lo que, por supuesto, debes limpiar este artículo antes de usarlo.
El rango de temperatura alta del reactivo Bradford debe coincidir con el ajuste en la cabina
– Dos problemas potenciales con la prueba de Bradford es que gran parte de la prueba a menudo solo es efectiva para el aumento de proteínas, y la muestra debe estar dentro de cualquier rango de temperatura y pH específico. Las muestras que contienen todas las proteínas requeridas por debajo de 3000-5000 Daltons son difíciles si desea leer debido a que la absorción en el proceso es baja.
A diferencia de otras pruebas médicas de salud, la prueba de proteínas de Bradford es menos sensible a los efectos de varios compuestos químicos como el sodio, el potasio o incluso la sacarosa similar a los carbohidratos, que posiblemente estarán presentes en las cantidades requeridas para las proteínas. Las excepciones son concentraciones excesivas de detergente.
Se pueden usar múltiples concentraciones de la muestra privada principal para mejorar la precisión. Añada 100 μl de reactivo de Bradford diluido a algunos pocillos. La inflación total es de 200 μl / bien. Espere por lo menos minutos significativos, pero no mucho más de 60 minutos, para que se desarrolle el color.
