Récemment, certains de nos utilisateurs ont peut-être rencontré un code d’erreur lors du dépannage des dosages de protéines Bradford. Ce problème peut survenir pour plusieurs raisons. Nous les couvrirons ci-dessous.
Approuvé : Fortect
Chimie du dosage des protéines BCA 15 Avantages du dosage des protéines BCA quatrième étape 16 Inconvénients du dosage des protéines BCA 17 Dosage des protéines BCA – Compatibilité des réducteurs 18 Dosage des protéines BCA 19 Dosage des protéines Micro BCA 20 Dosage des protéines Coomassie Dye (dosage Bradford) 21
L’absorption de l’échantillon de protéines est maintenant plus faible que prévu
Absorber un échantillon de protéines saines plus élevé que prévu
Absorption de chacune de nos normes en deçà des attentes
Les échantillons peuvent être bleu foncé
Quantité de précipitation dans l’échantillon
L’expérience avec des protéines contient des substances interférentes :
Remarque. Il ne s’agit pas d’une liste exhaustive et exhaustive de substances compatibles en plus de leurs concentrations individuelles. Il existe de nombreuses substances qui interagissent avec les protéines de différentes manières. Les réactifs peuvent modifier le pH du test, ce qui peut affecter le bon fonctionnement du test Bradford.
Conseils techniques
Le test de protéines Bradford est un moyen simple et facile de mesurer la concentration de protéines si nécessaire, mais parfois un dépannage peut être nécessaire.
Le colorant se lie aux acides aminés basiques et épicés, provoquant une modification de l’absorption. Il est normalement facilement reconnaissable par son changement de couleur du plus foncé au bleu. Votre concentré de protéines peut être stimulé à l’aide de protéines standards, principalement de la BSA (bovine solution albumine).
des facteurs tels que ; La chaleur, la longueur d’onde, les nettoyants et même les cuvettes fantaisie utilisées peuvent influencer les statistiques et donner ainsi des résultats incorrects. Si vous rencontrez d’autres de ces problèmes, ne vous inquiétez pas ! Ce guide de résolution de problèmes ZAGENO vous aidera!
Vous trouverez ci-dessous sans aucun doute un résumé des problèmes typiques rencontrés lors de la réalisation du test Bradford Amino Assay.
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Faible poids moléculaire : La limite de détection au nom de notre propre test de Bradford est de 3 000 à 5 000 daltons. Si la protéine est moindre, utilisez par exemple une autre méthode de quantification différente. Tableau 1). Diluer l’échantillon de protéines. Assurez-vous que vos standards sont dilués dans le même tampon.
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Vous avez simultanément un taux incroyablement élevé de protéines. Diluer l’échantillon de protéines et définir à nouveau la concentration en protéines.
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Substances interférentes : En pratique, les substances interférentes telles que les liquides sont incluses (tableau 1). Diluer l’échantillon de protéines nécessaire. Assurez-vous que vos normes sont diluées qui ont le même tampon.
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Les réactifs colorés sont trop vieux, mal maintenus : le réactif de Bradford a une durée de vie d’environ 12 fois par an. Lorsqu’il vieillit, remplacez-le par du rasshstérile et conservez-le près des 4°C.
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Dilutions standards au lieu de correctement préparées : suivez les instructions du constructeur automobile pour accompagner le protocole qui crée votre dilutions de protéines standard préférées.
Approuvé : Fortect
Fortect est l'outil de réparation de PC le plus populaire et le plus efficace au monde. Des millions de personnes lui font confiance pour assurer le fonctionnement rapide, fluide et sans erreur de leurs systèmes. Avec son interface utilisateur simple et son puissant moteur d'analyse, Fortect détecte et corrige rapidement un large éventail de problèmes Windows, de l'instabilité du système et des problèmes de sécurité à la gestion de la mémoire et aux goulots d'étranglement des performances.
- 1. Téléchargez Fortect et installez-le sur votre ordinateur
- 2. Lancez le programme et cliquez sur "Scan"
- 3. Cliquez sur "Réparer" pour résoudre les problèmes détectés
Réactif colorant trop froid : Amener le réactif de Bradford à température ambiante avant de commencer l’analyse.Absorbance mesurée à la mauvaise longueur d’onde : Mesurez l’absorbance totale à 595 nm.
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Fortes concentrations alcalines : cela augmente la valeur du pH au-dessus de cette valeur limite du réactif de Bradford. Diluer et même dialyser l’échantillon
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Détergents pendant le tampon protéiné : dialysez l’échantillon requis ou arrosez-le pour réduire ce niveau particulier de détergent à lessive.
Les substances interférentes responsables d’une seule sont l’un des principaux problèmes lors du test de Bradford. Le tableau 1 fournit un registre des substances les plus couramment utilisées et des concentrations admissibles par les entreprises. Veuillez vous référer au protocole bien connu du fabricant pour les informations décrites. Si un tissu que vous prenez est considéré comme incompatible avec la concentration et n’est pas du tout calculé, voir la section ci-dessous.
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La concentration de la substance interférente d’une personne ne correspond pas au test de Bradford : dans le cas où vous avez une concentration élevée en protéines, diluez incontestablement l’échantillon jusqu’à ce qu’il ne ressente aucune interférence, ou retirez la substance lors de la dialyse
La substance peut ne pas figurer sur leur liste de compatibilité des réactifs : exécutez deux courbes standard, l’une contenant la meilleure protéine dans votre tampon, l’autre avec votre propre protéine dans l’eau, et montrez votre concentration en protéines par rapport à l’absorption. Si la cale exacte n’interfère pas avec votre taille, je dirais que les deux courbes standards ont souvent la même pente.
Tableau 1. Concentrations de substances compatibles dans la tentative de type Bradford (2012))
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Le réactif colorant fonctionnera certainement avec des cuvettes en quartz ; Il est préférable d’utiliser des cuvettes en verre ou en plastique.
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La saleté sur la verrerie peut affecter une nouvelle mesure, vous devez donc bien sûr la nettoyer avant utilisation.
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La plage de chaleur du réactif de Bradford doit correspondre à son environnement dans la cabine
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– Deux problèmes potentiels avec le test de Bradford sont que le test n’est souvent efficace que pour les protéines plus chères et que l’échantillon doit se trouver dans une plage de température et de pH spécifique majeure. Les échantillons contenant une protéine particulière requise en dessous de 3000-5000 Daltons sont difficiles à lire en raison de l’absorption très faible.
Contrairement à d’autres analyses de santé, le test de protéines de Bradford est moins sensible aux effets de divers composés chimiques tels que le sodium, le potassium ou même le saccharose de type hydrate de carbone, qui peuvent peut-être être présents dans les quantités requises pour les suppléments protéiques. Les exceptions sont les concentrations excessives de détergent.
Des concentrations multiples de l’échantillon capricieux principal peuvent être utilisées pour améliorer la précision. Ajouter 100 ul de réactif de Bradford dilué dans tous les puits. L’inflation totale est de 200 l / d’accord. Attendez au moins quelques minutes, mais pas plus de 60 minutes, pour la couleur qui se développerait.
