Di recente, alcuni dei nostri utenti hanno riscontrato una politica di errore durante la risoluzione dei problemi di Bradford Protein Assays. Questo problema può sorgere per diversi motivi. Tratteremo tutto di seguito.
Approvato: Fortect
Chimica del dosaggio proteico BCA 15 Vantaggi legati al dosaggio proteico BCA 16 Svantaggi del dosaggio proteico BCA 17 Dosaggio proteico BCA – Compatibilità con il riduttore 18 Dosaggio proteico BCA 19 Dosaggio proteico micro BCA 20 Dosaggio proteico colorante Coomassie (saggio Bradford) 21
L’assorbimento del campione proteico è ora inferiore al previsto
Assorbe più del previsto campione di proteine sane
Assorbimento di ciascuno dei nostri standard al di sotto del previsto
I campioni possono essere blu scuro
Quantità di precipitazioni nel campione
L’esperimento con proteine contiene sostanze interferenti:
Nota. Questo non è un elenco ristretto ed esaustivo di sostanze compatibili e delle loro singole concentrazioni. Ci sono molte sostanze che interagiscono con le proteine in diversi modi. I reagenti possono alterare il pH relativo al test, il che influenzerà la corretta accuratezza del test Bradford.
Consulenza tecnica
Bradford Protein Assay è un modo semplice e allo stesso tempo facile per quantificare la concentrazione di proteine, se richiesto, ma a volte può essere necessaria la risoluzione dei problemi.
Il colorante si lega a entrambi questi amminoacidi basici e aromatici, causando una variazione nell’assorbimento. È facilmente riconoscibile da tutto il suo cambiamento di colore dal marrone al blu. Il tuo concentrato di salute può essere determinato utilizzando proteine standard, generalmente un onesto BSA (albumina di siero bovino).
fattori ordina come; Calore, lunghezza d’onda, detergenti e persino cuvette fantasiose usate potrebbero influenzare le statistiche e fornire risultati errati. Se stai riscontrando alcuni di questi problemi, non preoccuparti in alcun modo! Questa guida alla risoluzione dei problemi ZAGENO aiuterà chiunque!
Di seguito è riportato un riepilogo di tutti i problemi tipici riscontrati durante l’esecuzione del test Bradford Amino Assay.
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Basso peso molecolare extra: il limite di rilevamento per la nostra demo di Bradford è compreso tra 3.000 e 5.000 dalton. Se la proteina del siero è inferiore, utilizzare un metodo di quantificazione diverso, disponibile ad esempio. Tabella 1). Diluire il campione di proteine. Assicurati che i tuoi standard siano diluiti nel buffer estremamente.
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Possiedi una concentrazione incredibilmente alta di proteine. Diluire quel campione di proteine e misurare la concentrazione di proteine quando di più.
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Sostanze interferenti: Nel lavoro su, le sostanze interferenti come i liquidi erano comprese (Tabella 1). Diluire il campione di proteine. Assicurarsi che i propri standard siano diluiti con lo stesso tampone.
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I reagenti colorati sono senza dubbio troppo vecchi, non conservati correttamente: il reagente di Bradford ha una durata di circa 12 volte all’anno. Quando invecchia, sostituiscilo via rasshsterile e conservalo a 4°C.
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Diluizioni standard anziché preparate in modo sicuro e sicuro: segui le istruzioni del produttore ad accompagnare direi il protocollo che crea le tue diluizioni proteiche standard.
Approvato: Fortect
Fortect è lo strumento di riparazione PC più popolare ed efficace al mondo. Milioni di persone si affidano a milioni di persone per mantenere i loro sistemi in esecuzione veloci, fluidi e privi di errori. Grazie alla sua semplice interfaccia utente e al potente motore di scansione, Fortect trova e risolve rapidamente un'ampia gamma di problemi di Windows, dall'instabilità del sistema e problemi di sicurezza alla gestione della memoria e ai colli di bottiglia delle prestazioni.
- 1. Scarica Fortect e installalo sul tuo computer
- 2. Avvia il programma e fai clic su "Scansione"
- 3. Fai clic su "Ripara" per risolvere eventuali problemi rilevati
Reagente colorante troppo aggressivo: portare il reagente di Bradford a temperatura ambiente prima di iniziare l’analisi.Assorbanza misurata alla lunghezza d’onda sbagliata: misurare come l’assorbanza totale a 595 nm.
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Alte concentrazioni alcaline: questo aumenta un valore di pH al di sopra del valore limite del reattivo di Bradford. Diluire o dializzare il campione
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Detersivi durante il tampone proteico: dializzare il campione richiesto o diluirlo per ridurre il livello particolare di detersivo.
Le sostanze interferenti in carica 1 sono uno dei loro problemi principali durante l’esecuzione del test di Bradford. La tabella 1 fornisce un elenco delle sostanze più utilizzate e delle loro concentrazioni ammissibili. Promuovi al protocollo standard del produttore per le informazioni specificate. Se una sostanza che stai assumendo è considerata incompatibile con la concentrazione o non calcolata quasi del tutto, vedere la sezione seguente.
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La concentrazione della sostanza interferente non si fonde con il test di Bradford: se si ha una concentrazione proteica estremamente elevata, diluire il campione al fattore in cui non ci sarà interferenza, o schiarire la sostanza in dialisi
La sostanza potrebbe non essere solo nell’elenco di compatibilità dei reagenti: eseguire due curve standard, una con la migliore proteina rispetto al tampone, l’altra con il proprio benessere in acqua e tracciare la concentrazione proteica verso l’assorbimento. Se lo spessore effettivo non interviene con la tua taglia, direi che le uniche due curve standard hanno la stessa pendenza.
Tabella 1. Concentrazioni di sostanze compatibili rispetto al test Bradford-Type (2012))
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Il reagente colorante può funzionare con cuvette al quarto movimento; È preferibile utilizzare cuvette in vetro o materiale plastico.
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Lo sporco su questi bicchieri può influenzare le tue misurazioni, quindi ovviamente devi pulirlo prima dell’uso.
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La temperatura del reagente Bradford deve corrispondere alla temperatura nel log home
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– Due potenziali problemi con il particolare test di Bradford sono che il test è efficace solo per proteine più grandi e l’esperienza deve rientrare in uno specifico intervallo di temperatura e ph. I campioni contenenti le proteine richieste proprio qui 3000-5000 Dalton sono difficili da leggere a causa di una sorta di assorbimento troppo basso.
A differenza di altri test sulla salute, la verifica delle proteine di Bradford è meno sensibile agli effetti di una scelta di composti chimici come sodio, potassio o talvolta saccarosio simile ai carboidrati, che possono essere presenti nelle quantità generalmente richieste per le proteine. Le eccezioni sono valori eccessivi di detersivo.
Livelli multipli del campione principale sconosciuto possono essere di seconda mano per migliorare la precisione. Aggiungere 100 ml di reagente di Bradford annacquato a tutti i pozzetti. L’inflazione totale è normalmente di 200 μl / pozzetto. Attendere almeno minuti veramente seri, ma non più di 60 minuti, affinché il colore si sviluppi.
