Approvato: Fortect
Se il tuo computer echeggia un errore di risoluzione dei problemi della colonna cromatografica, consulta questi suggerimenti per la correzione.
MarylandA seconda della situazione, a volte è possibile migliorare la superficie redditizia aumentando il numero moderno di vassoi della colonna, utilizzando meno attracco e potrebbe aumentare la lunghezza della colonna. Gli svantaggi di questi approcci sono problemi operativi più complessi e tempi di separazione più lunghi per prodotti più lunghi.Maria Fine
Come identificare, isolare e risolvere i problemi più comuni
Sebbene la progettazione dei metodi HPLC-HPLC sia migliorata con il miglioramento della tecnologia delle colonne e degli strumenti, continuano a sorgere problemi. In questa guida, offriamo alle famiglie un modo sistematico per isolare, identificare e correggere una serie di problemi HPLC comuni.
I compiti importanti di 1 sistema HPLC sono gli stessi se si utilizza un sistema modulare oltre a un dispositivo notevolmente complesso. Qualsiasi richiesta può causare problemi che possono influire sulle prestazioni complessive del sistema. Diversi problemi sono spesso discussi qui. Soluzioni al motivo per cui questi problemi sono presentati in tabelle intuitive.
Identificazione dei problemi HPLC
Quali sono i problemi di risoluzione dei problemi guide per la cromatografia a propano?
Ridurre il flusso a una piccola quantità superiore a quella buona. Portata della colonna troppo bassa. Aumentare la corrente leggermente al di sopra dell’ottimale. Flusso frazionario troppo basso a causa dell’iniezione parziale. Prestazioni della colonna deteriorate. Testare il pilastro alla nuova portata ottimale. Iniettore sporco. Pulisci e sostituisci il rivestimento. Una parte fissa che si è appena accumulata nella presa. Rimuovi gli ultimi due anelli dal palo.
I problemi possono verificarsi in molti punti del sistema HPLC. Isolare prima il problema della definizione e isolare bene la fonte effettiva.
Utilizzare la tabella 1 per determinare quali componenti possono causare il problema. Eliminarli di solito mostra i dettagli e risolve la natura dello scenario.
Come evitare problemi nella fase mobile
La scarsa comprensione e l’aumento delle linee di base, il rumore e forse i picchi nel cromatogramma effettivo possono spesso essere attribuiti alla fase wireless. I contaminanti nella fase mobile causano importanti problemi di eluizione in gradiente. La linea di base può aumentare ed inoltre possono comparire falsi picchi all’aumentare del flat del componente contaminato.
L’acqua è la base di inquinamento più comune che può essere eliminata con l’analisi per fasi. Per la produzione di fasi mobili, consumare solo acqua distillata o demineralizzata di altissima purezza. Tuttavia, alcuni deionizzatori comuni rilasciano nell’acqua contaminazioni tossiche organiche. Per rimuovere queste impurità, alimentare acqua demineralizzata tramite carbone attivo o colonna preparativa C18.
Utilizzare solo solventi HPLC, sali, reagenti ionici, modificatori di usura e modificatori alcalini e del livello di acidità. La pulizia con solventi di qualità inferiore richiede molto tempo e spesso lascia tracce di impurità. Queste tracce attaccate ai contaminanti possono causare problemi se si passa attraverso un rilevatore che è ipersensibile ai raggi UV e forse anche alla fluorescenza.
Le lamentele relative al deterioramento sono l’aspetto scadente dei picchi, la suddivisione dei picchi, i rigonfiamenti, la perdita di risoluzione, il tempo di conservazione ridotto e l’elevata contropressione. Questi sintomi indicano che i contaminanti si sono accumulati sul nostro run frit o sull’ingresso della colonna, o che sembrano esserci vuoti, canali o depressioni nello strato di riempimento.
Poiché molti tamponi d’acqua promuovono tumori batterici o algali, dovresti preparare queste soluzioni fresche per il commensale e filtrarle prima di bere (filtro da 0,2 micron o possibilmente da 0,45 micron) . Il filtraggio rimuove anche le particelle che possono effettivamente creare una linea di base rumorosa o molte volte intasare una colonna. Prevenire la crescita microbica guadagnando circa $ 100 di sodio azide in tamponi acquosi. In alternativa, questi tamponi possono anche essere raggruppati insieme con il 20% o più di solventi organici come quasi etanolo e acetonitrile.
Quali suggerimenti in genere e trucchi per la cromatografia del sorriso?
Qui condividiamo suggerimenti e trucchi per aiutare il tuo sito a sorridere, risolvere alcuni problemi comuni di cromatografia su colonna, anche alcune alternative veloci e sporche alla colonna piena. Abbiamo precedentemente spiegato come impostare la colonna ideale e come selezionare metodi e possibili solventi.
Degassare questa fase mobile per prevenire la formazione di bolle nel sistema. In generale, un degasatore in linea è sicuramente la scelta numero uno, ma il degasaggio dotato di elio può essere sostenibile se la singola fase non contiene ingredienti non standard.
Utilizzare con cura i reagenti a coppia ionica. La lunghezza massima della sequenza e la concentrazione del reagente devono essere ispirate per ogni ciclo. Le concentrazioni possono essere da 0,2 mM, più fino a 150 mM, molti o. In generale, l’aumento della concentrazione o del tempo di ciclo aumenterebbe probabilmente il tempo di ritenzione. Alte concentrazioni (> 50%) da acetonitrile o qualche altra materia organica potrebbero certamente causare la deposizione ionica delle coppie di reagenti. Nel componente, alcuni degli ioni sale dei reagenti abbinati possono essere insolubili in acqua e dovrebbero certamente precipitare. Evitare l’uso di tamponi contenenti sodio quando si avventurano acidi solfonici a catena lunga (come il cloruro di sodio marino dodecilsolfato) invece di tamponi contenenti potassio.
Modificatori di elementi e acidi volatili come la trietilammina (TEA) ma anche quindi l’acido trifluoroacetico (TFA) sono utili per la tua attività se vuoi estrarre una connessione reale durante ulteriori analisi. Questi modificatori evitano anche i problemi con i reagenti a basso contenuto di ioni. Possono rimanere aggiunti allo schermo a concentrazioni da 0,1 a 1,0% di TEA o da 0,01 a 0,15% di TFA. L’aumento della quantità può migliorare il profilo del picco per più composti, ma può modificare il tempo di conservazione.
Approvato: Fortect
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Il riciclaggio di un particolare punto mobile nel tempo utilizzato per la separazione isocratica sta diventando sempre più importante per ridurre i costi dei solventi, ridurre la punta delle dita e ridurre i tempi di preparazione della fase mobile. Solvente Il nuovo dispositivo di ricrescita utilizza una valvola mobile controllata da un microprocessore che dirige il flusso del solvente in modo che gli esperti affermino che venga sprecato quando viene determinato un picco. Se la linea di base scende al di sotto del limite abbastanza alto selezionato, il solvente non contaminato viene restituito al contenitore favorevole.
Problemi di isolamento della pompa
Il dispositivo deve fornire una portata regolarea, favorevole per la colonna, in una vasta gamma di condizioni. Le pompe HPLC sono dotate di tacco alto ad aria primaria oa doppio pistone, siringa o diaframma.
I problemi con il sistema di pompaggio sono generalmente facili da combinare con Spot Correct. Alcuni dei sintomi irregolari più comuni sono da giorni a settimane di ritenzione, anomalie o picchi in un cromatogramma. Se la cromatografia è inadeguata, ci saranno perdite vicino ai raccordi o alle guarnizioni della pompa specifica. Un segno sicuro legato a una perdita è l’accumulo di sali attraverso l’ugello della pompa. Tamponi e sali spesso richiedono di essere eliminati dal sistema normalmente con acqua deionizzata pulita. Per isolare e migliorare e persino rimuovere problemi unici con il tuo dispositivo consumer, fai riferimento alle sezioni specifiche per la risoluzione dei problemi e la manutenzione nella tua attuale guida esistente. Le guarnizioni della pompa devono essere riparate regolarmente. È necessario eseguire una manutenzione regolare, invece di essere completamente preparati per il problema.
Iniettore in aggiunta ai solventi per iniezione
L’iniettore inietta rapidamente la prova più grande nel sistema con un’interruzione minima del numero di solventi. Attualmente, gli articoli HPLC utilizzano iniettori ad anello variabile, iniettori ad anello fisso e inoltre iniettori a siringa. Vengono attivati manualmente, pneumaticamente o eventualmente elettricamente. Problemi
I meccanismi che interessano l’iniettore (es. crepe, capillari ostruiti, guarnizioni) saranno facilmente identificati e riparati. Utilizzare una vera e propria colonna di guardia che si filtra semplicemente per evitare l’intasamento della fritta dell’ugello dovuto all’usura corporea sulla particolare guarnizione dell’ugello. Altri dilemmi, come le iniezioni non riproducibili, sono più difficili da risolvere.
Altezze dei picchi differenti, picchi divisi e picchi semplicemente ampi possono essere causati da onde del campione limitate, incompatibilità del solvente iniettato sulla fase mobile principale o scarsa solubilità del controllo. Se possibile, sciogliere l’iniezione ei campioni nella fase di trasporto. Altrimenti, assicurati che questa soluzione di iniezione abbia una forza di eluizione inferiore per poter accedere al nostro telefono cellulare (tabella , passaggio 3). Si prega di notare che alcuni autopiloti utilizzano programmi di risciacquo delle siringhe individuali. Assicurarsi che la biancheria sia ora adatta alla selezione e sia più debole rispetto alla fase mobile o di trasporto. Questo è particolarmente importante quando si passa dall’analisi normale inversa all’analisi di fase.
Nome colonna = “protezione colonna”> Protezione
Mentre i filtri di aspirazione della fase mobile, i filtri pre-iniettore e la colonna di protezione e forniscono protezione alle colonne non sono parte integrante di quasi dispositivi, riducono notevolmente i problemi associati a separazioni complesse. Si consiglia di filtrare tutti i campioni dotati di filtri per siringa da 0,45 o 0,2 µm. La scelta dei pali protettivi è altamente raccomandata.
Anche i filtri e le colonne di protezione prevengono la ritenzione del particolato.
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