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컴퓨터 워크스테이션에 크로마토그래피 컬럼 문제 해결 오류가 표시되면 개별 수리 팁을 참조하십시오.
메릴랜드상황에 따라 이 특정 현재 컬럼 트레이 수를 늘리거나, 도킹을 상당히 적게 사용하거나, 컬럼 길이를 늘려 출구 발생을 개선할 수 있습니다. 이러한 접근 방식의 단점은 훨씬 더 긴 제품의 경우 더 복잡한 기능 문제와 더 긴 분리 시간입니다.메리 엔드
가장 일반적인 문제를 식별, 분리 및 수정하는 방법
컬럼 및 기기 기술의 발전으로 HPLC-HPLC 방법의 개발이 향상되었지만 여전히 문제가 발생합니다. 이 가이드에서 우리는 가족 구성원에게 많은 일반적인 HPLC 문제를 분리, 식별 및 적용하는 체계적인 방법을 제공합니다.
고객이 의미 있는 더 복잡한 장치 외에 모듈식 시스템을 사용하든 HPLC 시스템이 생성하는 중요한 작업은 동일합니다. 모든 요청은 전략의 전체 성능에 영향을 미치는 질병을 유발할 수 있습니다. 여기에서는 여러 가지 문제가 자주 논의됩니다. 이러한 문제에 대한 솔루션은 사용자에게 친숙한 표에 나와 있습니다.
HPLC 문제 식별
문제 해결이란 무엇입니까? 가스 크로마토그래피 중 가이드?
초기 최적의 소량으로 흐름을 줄입니다. 컬럼 유속이 너무 낮습니다. 각 흐름을 최적보다 약간 높입니다. 부분 주입으로 분수 흐름이 너무 할인됩니다. 열 성능이 저하되었습니다. 새로운 최적의 유속으로 특정 컬럼을 테스트하십시오. 더러운 인젝터. 라이너를 청소하고 교체하십시오. 소켓에 막 축적된 브로셔 단계. 모든 게시물에서 마지막 두 개의 링을 제거합니다.
하나의 HPLC 시스템에서는 여러 곳에서 문제가 발생할 수 있습니다. 그 위에 먼저 정의 문제를 분리한 다음 실제 소스를 분리합니다.
표 1을 사용하여 문제를 일으킬 수 있는 필수 요소를 확인하십시오. 그것들을 제거하면 세부 사항이 드러나고 문제 유형의 특성이 해결되는 경우가 많습니다.
이동 단계에서 문제를 피하는 방법
낮은 감도 및 증가하는 기준선, 노이즈, 크로마토그램을 통한 피크 가능성은 종종 새로운 이동상에 기인할 수 있습니다. 이동상의 오염 물질은 특별한 구배 용출 문제를 조장합니다. 기준선이 축적될 수 있으므로 오염된 구성 요소의 자체 수준이 증가함에 따라 잘못된 피크가 나타날 수 있습니다.
물은 위상 분석을 통해 제거할 수 있는 가장 잘 알려진 오염원입니다. 이동식 기간의 생산에는 절대적으로 좋은 순도의 증류수 또는 탈염수만 사용하십시오. 그러나 일부 일반적인 탈이온수기는 정상적인 오염 물질을 물에 방출합니다. 이러한 불순물을 제거하려면 활성탄 또는 분취 라인 C18을 통해 탈염수를 사용하십시오.
HPLC 용매, 염, 이온성 시약, 마모 조절제, 알칼리성 및 화학적 p 조절제만 사용하십시오. 더 낮은 품질의 솔벤트로 세척하는 것은 시간이 많이 걸리지만 종종 불순물의 흔적을 남깁니다. 이러한 오염 물질의 주름은 UV 또는 심지어 형광에 과민한 검출기를 사용하는 경우 문제를 일으킬 수 있습니다.
악화의 증상은 피크 스킨 불량, 피크 분리, 범프, 해상도 손실, 체류 시간 감소 및 높은 배압입니다. 이러한 징후와 증상은 오염 물질이 프릿 또는 컬럼 주입구에 축적되었거나 취하는 층에 공극, 채널 또는 함몰이 있음을 나타냅니다.
많은 물 완충액이 박테리아 또는 조류 성장을 촉진하기 때문에 저녁 식사에 사용할 수 있는 이러한 신선한 용액을 준비하고 마시기 전에 여과해야 합니다(0.2미크론 또는 0.45미크론 필터). 필터링은 또한 실제로 시끄러운 기준선을 만들거나 일반적으로 기둥을 막을 수 있는 먼지를 제거합니다. 성공적으로 수성 완충액에 약 $100의 아지드화나트륨을 추가하여 미생물 성장을 방지합니다. 또는 이러한 완충액을 에탄올 및 아세토니트릴과 같은 유형의 유기 용매와 20% 이상 혼합할 수도 있습니다.
몇 가지 팁 그리고 주문 크로마토그래피를 위한 요령은 무엇입니까?
여기에서 여러분이 미소 짓는 정보에 대한 팁과 트릭을 공유하고, 몇 가지 일반적인 컬럼 크로마토그래피 문제를 해결하고, 이 특정 전체 컬럼에 대한 몇 가지 빠르고 더러운 대안을 공유합니다. 이전에 이상적인 컬럼을 패키징하는 방법과 장치 및 가능한 용매에 정착하는 방법을 다루었습니다.
체격에 거품이 형성되는 것을 방지하기 위해 이 이동 보폭을 제거합니다. 일반적으로 인라인 탈기 장치는 특정 첫 번째 선택이지만 개별 단계에 비표준 구성 요소가 거의 또는 전혀 포함되어 있지 않은 경우 헬륨 장착 탈기가 각각의 대안이 될 수 있습니다.
이온쌍 시약은 주의해서 사용하십시오. 각 주기에 대해 최적의 시퀀스 길이와 시약 농도를 결정해야 합니다. 농도는 0.2mM에서 최대 150mM까지, 숫자 또는. 일반적으로 농도 또는 주기 여유 시간을 늘리면 머무름 시간이 늘어납니다. 다량(> 50%)의 아세토니트릴 또는 기타 유기 점은 시약 쌍의 이온 침착을 유발할 수 있습니다. 또한 모든 쌍을 이루는 시약의 일부 염 이온은 물에 불용성일 수 있으며 침전될 수도 있습니다. 칼륨이 포함된 완충액 대신 장쇄 설폰산(예: 바다 소금 도데실 설페이트)을 방문하기 때문에 나트륨이 포함된 완충액을 사용하지 마십시오.
트리에틸아민(TEA) 및 따라서 트리플루오로아세트산(TFA)과 같은 원소 변형제 및 휘발성 산은 추가 분석 중에 연결을 생성하려는 경우 비즈니스에 정말 유용합니다. 이러한 변형제는 저이온 시약의 문제도 방지합니다. 이제 0.1~1.0% TEA 또는 0.15% TFA 중 0.01과 관련된 농도로 스크린에 추가할 수 있습니다. 양을 늘리면 더 많은 화합물의 기본 모양이 개선될 수 있지만 이러한 머무름 시간이 변경될 수 있습니다.
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등용매 분리에 사용되는 특정 컴팩트 상을 재활용하여 용매 비용을 줄이고 손끝을 줄이며 이동상 준비 시간을 단축하기 위해 최근 인기를 얻고 있습니다. 용매 재생 장치는 피크가 항상 감지될 때 낭비되도록 용매 흐름을 지시하는 마이크로프로세서에 의해 제어되는 모바일 밸브를 사용합니다. 기준선이 고려 상한선 아래로 떨어지면 오염되지 않은 용매가 용매 용기로 반환됩니다.
펌프 문제 분리
장치는 광범위한 조건에서 컬럼에 유리한 최신의 일정한 유속을 제공해야 합니다. HPLC 펌프에는 단일 또는 이중 피스톤, 주사기 또는 다이어프램 오라 펌프가 있습니다.
펌핑 시스템의 문제는 일반적으로 Spot Correct와 결합하기 쉽습니다. 가장 흔한 불규칙한 증상 중 일부는 보관 시간, 이상 또는 크로마토그램의 피크입니다. 크로마토그래피가 부적절하면 펌프 피팅이나 씰을 닫아 누출이 발생합니다. 누출의 확실한 상징은 펌프 노즐에 염분이 축적된 것입니다. 정기적으로 버퍼와 염은 깨끗한 탈이온수로 매일 장비에서 씻어내야 합니다. 소비자 장치의 고유한 문제를 분리하여 해결하려면 기존 가이드의 특정 문제 해결 및 유지 관리 섹션으로 승격하십시오. 펌프 씰은 정기적으로 교체해야 합니다. 문제에 대한 완전한 준비가 아니라 정기적인 서비스를 수행해야 합니다.
주입 용매 외에 주입기
인젝터는 양의 흐름 psolvent에 대한 최소한의 중단으로 더 큰 샘플을 시스템에 신속하게 주입합니다. 현재 HPLC 제품은 가변 루프 인젝터, 고정 루프 인젝터 및 주사기 인젝터를 사용합니다. 수동, 공압 또는 전기적으로 활성화됩니다. 문제
인젝터에 영향을 미치는 메커니즘(예: 균열, 막힌 모세관, 씰)을 쉽게 식별하고 수리할 수 있습니다. 특정 노즐 씰의 물리적 마모로 인해 노즐 프릿이 막히는 것을 방지하기 위해 간단히 필터링하는 가드 컬럼을 사용하십시오. 재현할 수 없는 주입과 같은 다른 문제는 해결하기가 더 쉽지 않습니다.
다른 피크 높이, 분할 산 및 넓은 피크는 불완전한 샘플 웨이브 사용, 주입된 용액과 주 이동상의 비호환성 또는 불량 체크 아웃 용해도를 사용하여 잠재적으로 발생할 수 있습니다. 가능한 경우 모든 전달 단계에서 주입 및 샘플을 용해합니다. 그렇지 않으면 주입 용액에 대한 용출 푸시가 당사 휴대폰보다 낮은지 확인하십시오( 식탁, 3단계). 일부 autosMplers는 별도의 주사기 헹굼 프로그램을 고려합니다. 세탁이 선택에 적합하고 이동상이나 캐리상보다 약한지 확인하십시오. 이것은 역정상 평가와 위상 분석 사이를 전환할 때 특히 중요합니다.
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이동식 섹션 입구 필터, 사전 주입기 및 보호 컬럼 필터, 보호 컬럼은 대부분의 장치와 관련된 필수 부품은 아니지만 복잡한 분리와 관련된 문제를 크게 줄입니다. . 0.45 또는 0.2 µm 주사기 필터로 모든 생물학적 물질을 필터링하는 것이 좋습니다. 보호 포스트를 사용하는 것이 좋습니다.
필터와 가드 컬럼도 공기 입자 체류를 방지합니다.
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