최근 일부 개인 사용자가 Bradford 단백질 분석 문제를 해결하는 동안 오류 코드를 발견했습니다. 이 문제는 여러 가지 이유로 발생할 수 있습니다. 아래에서 다루겠습니다.
Table of Contents
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BCA 단백질 분석과 관련된 화학 15 BCA 단백질 분석의 장점 16 BCA 단백질 분석의 단점 teen BCA 단백질 분석 – 감속기 호환성 18 BCA 단백질 분석 19 마이크로 BCA 단백질 분석 50 쿠마시 염료 단백질 분석(브래드포드 분석) 21
이제 단백질 샘플의 흡수가 예상보다 낮습니다
건강한 단백질 샘플을 예상보다 더 많이 흡수
기대 이하의 각 표준의 흡수
샘플은 진한 파란색일 수 있음
샘플의 강수량
간섭 물질이 포함된 단백질 실험:
참고. 이것은 단순히 작업 물질 및 개별 농도의 철저하고 철저한 목록이 아닙니다. 서로 다른 방식으로 단백질과 상호작용하는 많은 양의 물질이 있습니다. 시약은 브래드포드 테스트의 정확한 성능에 영향을 미치는 See의 pH를 변경할 수 있습니다.
기술 조언
Bradford 단백질 분석은 필요한 경우 단백질 농도를 정량화하는 간단하고 쉬운 가장 좋은 방법이지만 종종 문제 해결이 필요할 수 있습니다.
염료는 방향족 아미노산 외에도 염기성 아미노산에 결합하여 흡수에 변화를 일으킵니다. 갈색에서 파란색으로 변하는 것으로 쉽게 식별됩니다. 단백질 농축액은 표준 단백질, 주로 BSA(소 혈청 알부민)를 사용하여 쉽게 결정할 수 있습니다.
다음과 같은 요인; 열, 파장, 세제 및 사용된 팬시 큐벳도 통계를 흔들고 잘못된 결과를 줄 수 있습니다. 이러한 문제가 계속 발생하더라도 걱정하지 마십시오! 이 ZAGENO 문제 해결 가이드가 도움이 될 것입니다!
다음은 Bradford Amino Assay Test를 수행할 때 발생하는 일반적인 문제에 대한 요약입니다.
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저분자량: 자체 Bradford 테스트의 센서 한계는 3,000 ~ 5,000 달톤입니다. 단백질이 많은 경우 예를 들어 다른 정량화 방법을 사용하십시오. 1 번 테이블). 단백질 샘플을 희석합니다. 실제 표준이 동일한 버퍼에 희석되었는지 확인하십시오.
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당신은 비정상적으로 높은 농도의 단백질을 가지고 있습니다. 단백질을 희석하여 다시 단백질 농도를 측정하십시오.
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간섭 물질: 실제로는 액체와 같은 간섭 물질이 포함됩니다(표 1). 단백질 샘플을 희석합니다. 표준이 동일한 완충액으로 희석된 상태를 유지하는지 확인하십시오.
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착색된 시약은 너무 오래 보관되어 제대로 보관되지 않습니다. Bradford 시약의 표시 수명은 1년에 약 12번입니다. 오래되면 4 ° C에 보관하는 것 외에도 rasshsterile로 교체하십시오.
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적절하게 준비하는 대신 표준 희석액: 표준 단백질 희석액을 만듭니다.
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염료 시약이 너무 차가움: 분석을 시작하기 전에 Bradford 시약을 실온으로 가져옵니다.잘못된 파장에서 의도된 흡광도: 595nm에서 최종 흡광도를 측정합니다.
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높은 알칼리 농도: 이것은 Bradford 시약의 한계값 이상에 대한 pH 관리를 증가시킵니다. 샘플 희석 또는 투석
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단백질 완충제 중 세제: 필요한 그룹을 투석하거나 희석하여 이 특정 양의 세제를 줄이십시오.
전하 1 동안 간섭 물질은 브래드포드 테스트를 수행할 때 주요 상황 중 하나입니다. 표 1은 가장 일반적으로 사용되는 화합물 및 허용 농도 목록을 제공합니다. 설명된 내용은 제조사의 표준 프로토콜을 참조하시기 바랍니다. 복용 중인 물질이 농도와 양립할 수 없거나 전혀 계산되지 않은 것으로 간주되는 경우 아래 페이지를 참조하십시오.
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간섭 물질과 관련된 농도가 Bradford 테스트와 일치하지 않습니다. 단백질 인지도가 높으면 샘플을 여러 개 간섭이 없을 정도로 희석하거나 기초를 제거합니다. 투석 중
물질이 시약 호환성 목록에 직접 없을 수 있습니다. 두 가지 표준 모양을 실행하십시오. 그리고 단백질 농도 대 흡수를 플롯합니다. 실제 심이 당신의 놀라운 크기를 방해하지 않는다면, 나는 두 개의 표준 조정이 같은 기울기를 갖는다고 말할 것입니다.
표 1. Bradford-Type 시험(2012)에서 상용성 물질의 농도
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테이크 염료 시약은 석영 큐벳과 함께 사용할 수 있습니다. 유리 또는 플라스틱 큐벳을 사용하는 것이 가장 좋습니다.
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유리 제품의 먼지는 측정에 영향을 줄 수 있으므로 사용하기 전에 세척해야 합니다.
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Bradford 시약의 온도는 기내 온도와 맞아야 합니다.
– Bradford 시험의 두 가지 잠재적인 문제는 시험이 종종 더 큰 단백질에 대해서만 강력하고 샘플이 실제로 특정 온도 및 pH 범위 내에 있어야 한다는 것입니다. 3000-5000달톤 미만의 필수 단백질을 포함하는 샘플은 현재 흡수율이 너무 낮아 이미 읽기가 어렵습니다.
대체 건강 검사와 달리 Bradford 단백질 검사는 단백질에 필요한 양으로 존재할 수 있는 나트륨, 칼륨 또는 탄수화물과 같은 자당과 같은 다양한 화학적 하이브리드의 영향에 덜 민감합니다. 과도한 농도의 세제는 예외입니다.
정확하지 않은 주요 샘플의 다중 농도를 사용하여 정확도를 개선할 수 있습니다. 모든 우물에 희석 브래드포드 시약 100 μl를 추가합니다. 총 팽창은 150μl/well입니다. 색조가 나타날 때까지 최소 몇 분, 60분을 넘지 않도록 기다립니다.
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