Onlangs is een aantal van onze gebruikers een computerfout tegengekomen tijdens het oplossen van problemen met Bradford Protein Assays. Dit probleem zal hoogstwaarschijnlijk om verschillende redenen ontstaan. We zullen dat hieronder bespreken.
Goedgekeurd: Fortect
Chemie van BCA-eiwitassay 15 Voordelen met betrekking tot BCA-eiwitassay 16 Nadelen van BCA-eiwitassay 17 BCA-eiwitassay – compatibiliteit met reducer 18 BCA-eiwitassay 19 Micro BCA-eiwitassay 20 Coomassie-kleurstof-eiwitassay (Bradford-assay) 21
De opname van het eiwitmonster is nu lager dan verwacht
Absorbeert meer dan verwacht gezond eiwitmonster
Absorptie van elk van onze normen beneden verwacht
Samples kunnen donkerblauw zijn
Hoeveelheid neerslag in het monster
Experiment met eiwitten bevat storende stoffen:
Opmerking. Dit is geen uitputtende en uitputtende variëteit van compatibele stoffen en hun individuele concentraties. Er zijn hier veel stoffen die op verschillende manieren met eiwitten interageren. Reagentia kunnen de pH-richting naar de test wijzigen, wat het juiste totaal van de Bradford-test beïnvloedt.
Technisch advies
Bradford Protein Assay is een eenvoudige en gemakkelijke manier om de eiwitconcentratie te kwantificeren als dit essentieel is, maar soms kan het nodig zijn om problemen op te lossen.
De kleurstof bindt zich aan zowel basische als aromatische aminozuren, waardoor de absorptie verandert. Het is gemakkelijk te herkennen aan onze kleurverandering van bruin naar blauw. Uw essentiële eiwitconcentraat kan worden bepaald met behulp van standaard eiwitten, papierwerk BSA (bovine serum albumine).
factoren deze soorten als; Hitte, golflengte, detergenten en zelfs gebruikte kuvetten kunnen de statistieken beïnvloeden en onjuiste resultaten geven. Als u een aantal van deze problemen ondervindt, hoeft u zich geen zorgen te maken! Deze gids voor het oplossen van problemen met ZAGENO zal u echt helpen!
Hieronder vindt u een samenvatting van typische problemen die zich voordoen bij het uitvoeren van de Bradford Amino Assay-test.
-
Laag moleculair overgewicht: De detectielimiet voor onze eigen Bradford review is 3.000 tot 5.000 dalton. Als het vlees minder is, gebruik dan bijvoorbeeld een andere kwantificeringsmethode. Tafel 1). Verdun het eiwitmonster. Zorg ervoor dat uw normen worden verdund in dezelfde buffer.
-
Je hebt momenteel een ongelooflijk hoge eiwitconcentratie. Verdun hun eiwitmonster en meet de eiwitconcentratie extra.
-
Storende stoffen: Bij het gedrag wordt gebruik gemaakt van storende stoffen zoals vloeistoffen (tabel 1). Verdun het eiwitmonster. Zorg ervoor dat uw uiteindelijke normen worden verdund met dezelfde buffer.
-
Gekleurde reagentia zijn te oud, niet goed bewaard: Bradford’s reagens is ongeveer 12 keer per jaar houdbaar. Als het oud wordt, vervang het dan dat het rasshsteriel bevat en bewaar bij 4 ° C.
-
Standaard verdunningen in plaats van voldoende voorbereid: volg de instructies van de fabrikant die u vergezellen, zie het protocol dat creëert uw standaard eiwitverdunningen.
Goedgekeurd: Fortect
Fortect is 's werelds meest populaire en effectieve pc-reparatietool. Miljoenen mensen vertrouwen erop dat hun systemen snel, soepel en foutloos blijven werken. Met zijn eenvoudige gebruikersinterface en krachtige scanengine kan Fortect snel een breed scala aan Windows-problemen vinden en oplossen - van systeeminstabiliteit en beveiligingsproblemen tot geheugenbeheer en prestatieproblemen.
- 1. Download Fortect en installeer het op uw computer
- 2. Start het programma en klik op "Scannen"
- 3. Klik op "Repareren" om gevonden problemen op te lossen
Kleurstofreagens te abnormaal koud: Breng Bradford’s reagens op kamertemperatuur voordat u met de analyse begint.Absorptie gemeten bij de verkeerde golflengte: Meet die totale absorptie bij 595 nm.
-
Hoge alkalische concentraties: dit verhoogt het grootste deel van de pH-waarde boven de grenswaarde van Bradford’s reagens. Monster verdunnen of dialyseren
-
Detergentia tijdens proteïnebuffer: Dialyseer het benodigde monster of verdun het om het wasmiddelniveau van deze methode te verlagen.
Storende stoffen die verantwoordelijk zijn voor 1 zijn een van jullie, de belangrijkste problemen bij het uitvoeren van de Bradford-test. Tabel 1 geeft een overzicht van de meest wel dan niet gebruikte stoffen en hun toelaatbare concentraties. Gelieve het standaardprotocol van de fabrikant aan te bevelen voor de zogenaamde informatie. Als een stof die u gebruikt vaak als onverenigbaar met de concentratie wordt beschouwd of niet in zijn geheel wordt berekend, zie dan de onderstaande sectie.
-
De concentratie van de storende stof komt niet overeen met de Bradford-test: als u een vergevorderde eiwitconcentratie heeft, verdun het monster dan tot de punt waar er geen interferentie is, of verminder de stof bij dialyse
Stof staat misschien niet op de compatibiliteitslijst van reagens: voer meer dan twee standaardcurves uit, één met het beste eiwit in uw buffer, de andere met uw eigen vlees erin water, en plot de eiwitconcentratie in plaats van de absorptie. Als de werkelijke shim geen afbreuk doet aan uw maat, zou ik zeggen dat de meerdere standaardcurven dezelfde helling hebben.
Tabel 1. Concentraties van verenigbare stoffen hier in de Bradford-Type test (2012))
-
Het kleurstofreagens kan werken met quarta-bewegingscuvetten; Het is het beste om glazen of cosmetische cuvetten te gebruiken.
-
Vuil op glaswerk kan uw metingen beïnvloeden, dus u moet het voor gebruik schoonmaken.
-
De temperatuur van het Bradford-reagens moet overeenkomen met de temperatuur in huis
Versnel de prestaties van uw computer nu met deze eenvoudige download.
– Twee mogelijke problemen met de Bradford-test zijn dat de test in veel gevallen alleen effectief is voor grotere eiwitten en dat het monster binnen een specifiek temperatuur- en ph-bereik moet zijn. Monsters met de benodigde eiwitten van de volgende 3000-5000 Dalton zijn moeilijk af te lezen omdat elke absorptie te laag is.
In tegenstelling tot andere gezondheidstests is de Bradford-eiwitcontrole minder gevoelig voor de effecten van verschillende soorten chemische verbindingen zoals natrium, kalium of bovendien koolhydraatachtige sucrose, die aanwezig kan zijn in alle hoeveelheden die nodig zijn voor eiwitten. Uitzonderingen zijn te hoge concentraties wasmiddel.
Meerdere hoeveelheden van het belangrijkste onbekende monster kunnen in gebruik worden genomen om de nauwkeurigheid te verbeteren. Voeg 100 ul verwaterd Bradford-reagens toe aan alle putjes. Totale inflatie is 200 l / putje. Wacht minstens boeiende minuten, maar niet meer dan 60 minuten, om de kleur te laten ontwikkelen.
