Ostatnio niektórzy z naszych użytkowników napotkali kod błędu podczas rozwiązywania problemów z testami Bradford Protein Assay. Ten problem może powstać z kilku powodów. Omówimy je poniżej.
Zatwierdzono: Fortect
Chemia ze względu na oznaczenie białka BCA 15 Zalety oznaczenia białka BCA 16 Wady oznaczenia białka BCA w porównaniu z siedemnastoma oznaczeniami białka BCA — zgodność redukcyjna 18 Badanie białka BCA 19 Badanie białka Micro BCA 17 Badanie białka Coomassie Dye (Test Bradforda) 21
Wychwyt próbki białka jest teraz niższy niż oczekiwano
Wchłaniaj wyższą niż oczekiwano próbkę zdrowego białka
Absorpcja każdego z naszych standardów poniżej oczekiwanego
Próbki mogą być ciemnoniebieskie
Ilość opadów w próbce
Eksperyment z białkami zawierającymi substancje zakłócające:
Uwaga. To naprawdę nie jest wyczerpująca i wyczerpująca lista właściwych substancji i ich poszczególnych stężeń. Istnieje kilka substancji, które wchodzą w interakcje z białkami w różnych podejściach. Odczynniki mogą zmienić pH znaleziska, co wpłynie na prawidłowe wykonanie tego konkretnego testu Bradforda.
Porady techniczne
Test Bradford Protein Assay jest prostym i łatwym sposobem ilościowego określenia stężenia białka, jeśli to konieczne, ale naprawdę może być wymagane rozwiązywanie problemów.
Barwnik wiąże się zarówno z aminokwasami podstawowymi, jak i aromatycznymi, powodując zmianę spożycia. Łatwo go rozpoznać po zmianie koloru z brązowego na niebieski. Twój koncentrat białkowy będzie oznaczany przy użyciu standardowych białek, głównie BSA (albumina surowicy bydlęcej).
czynniki takie jak; Ciepło, długość fali, detergenty, a nawet używane Kuwety fantazyjne mogą oczarować statystyki i dać błędne wyniki. Jeśli nadal masz niektóre z tych problemów, nie martw się! Ten przewodnik rozwiązywania problemów ZAGENO pomoże Ci!
Poniżej znajduje się podsumowanie typowych powikłań napotykanych podczas wykonywania testu Bradford Amino Assay.
-
Niska masa cząsteczkowa: Limit detektorów dla naszego własnego testu Bradforda wynosi od 3000 do 5000 daltonów. Jeśli białka jest znacznie mniej, użyj na przykład innej metody oznaczania ilościowego. Tabela 1). Rozcieńczyć próbkę białka. Upewnij się, że wszystkie standardy są rozcieńczone w tym samym buforze.
-
Masz wyjątkowo wysokie stężenie białka. Rozcieńczyć przykładowe białko i ponownie zmierzyć stężenie białka.
-
Substancje zakłócające: W praktyce uwzględnia się zakłócające składniki naturalne, takie jak płyny (Tabela 1). Rozcieńczyć próbkę białka. Upewnij się, że twoje standardy są rozcieńczone tym samym buforem.
-
Kolorowe odczynniki są zbyt świeże, nie są prawidłowo przechowywane: odczynnik Bradforda ma trwałość półki około 12 razy w roku. Gdy się zestarzeje, wymień go na rasshsterile i w konsekwencji przechowuj w temperaturze 4 °C.
-
Standardowe rozcieńczenia zamiast odpowiednio przygotowanych: wynika z instrukcji producenta dołączonych do protokołu fakt, który tworzy twoje standardowe rozcieńczenia białek.
Zatwierdzono: Fortect
Fortect to najpopularniejsze i najskuteczniejsze narzędzie do naprawy komputerów na świecie. Miliony ludzi ufają, że ich systemy działają szybko, płynnie i bez błędów. Dzięki prostemu interfejsowi użytkownika i potężnemu silnikowi skanowania, Fortect szybko znajduje i naprawia szeroki zakres problemów z systemem Windows - od niestabilności systemu i problemów z bezpieczeństwem po zarządzanie pamięcią i wąskie gardła wydajności.
- 1. Pobierz Fortect i zainstaluj na swoim komputerze
- 2. Uruchom program i kliknij „Skanuj”
- 3. Kliknij „Napraw”, aby naprawić znalezione problemy
Odczynnik barwiący zbyt zimny: Przed rozpoczęciem analizy doprowadź odczynnik Bradforda do temperatury pokojowej.Absorbancja obliczona przy niewłaściwej długości fali: Zmierz absorbancję końcową przy 595 nm.
-
Wysokie stężenia zasadowe: zwiększa to wartość pH powyżej wartości granicznej odczynnika Bradforda. Rozcieńczenie lub dializa próbki
-
Detergenty w buforze białkowym: Dializuj wymaganą winietę lub rozcieńczaj ją, aby zmniejszyć ten konkretny obszar detergentu.
Substancje zakłócające podczas ładowania 1 są jednym z głównych zmartwień podczas wykonywania testu Bradforda. Tabela 1 zawiera zestawienie najczęściej stosowanych aspektów i ich dopuszczalnych stężeń. Opisane informacje można znaleźć w standardowym protokole nowego producenta. Jeśli substancja, którą przyjmujesz, została uznana za niezgodną ze stężeniem lub w ogóle nie została obliczona, patrz zdania poniżej.
-
Stężenie substancji zakłócającej nie jest zgodne z testem Bradforda: jeśli masz dużą grupę białek, rozcieńcz próbkę do punktu, w którym nie będzie żadnych zakłóceń, lub usuń głębokość podczas dializy < /p>
Substancja może nie być listą kompatybilności odczynników: wykonaj dwie standardowe krzywizny, jedną z najlepszym białkiem w przeszkodzie, drugą z własnym białkiem w połykanej wodzie i wykreśl stężenie białka a wchłanianie. Jeśli rzeczywista podkładka nie koliduje z twoim osobistym rozmiarem, powiedziałbym, że dwa standardowe kształty mają takie samo nachylenie.
Tabela 1. Stężenia substancji zgodnych w teście Bradford-Type (2012))
-
Odczynnik barwny może współpracować z kuwetami kwarcowymi; Najlepiej używać kuwet szklanych lub plastikowych.
-
Brud na naczyniach szklanych może mieć wpływ na Twoje wymiary, więc oczywiście będziesz chciał je wyczyścić przed użyciem.
-
Temperatura odczynnika Bradforda musi odpowiadać temperaturze w kabinie
Przyspiesz teraz wydajność swojego komputera dzięki temu prostemu pobieraniu.
– Dwa potencjalne problemy z eksperymentem Bradforda polegają na tym, że test jest często skuteczny tylko w przypadku większych białek, a próbka musi znajdować się w określonym zakresie temperatury i pH. Próbki zawierające wymagane białka poniżej 3000-5000 daltonów mogą być trudne do odczytania ze względu na naprawdę zbyt niską absorpcję.
W przeciwieństwie do wielu testów zdrowotnych, test białkowy Bradforda jest mniej wrażliwy na wpływy różnych chemicznych naturalnych pierwiastków, takich jak sód, potas, a nawet węglowodanopodobna sacharoza, które zazwyczaj mogą być obecne w ilościach podstawowych dla białka. Wyjątkiem są nadmierne stężenia detergentu.
Wiele stężeń tej głównej nieznanej próbki może być użytych z większą dokładnością. Do wszystkich dołków dodać 100 μl rozcieńczonego odczynnika Bradforda. Całkowita inflacja wynosi sto dziewięćdziesiąt μl/studzienkę. Odczekaj co najmniej znaczące minuty, ale nie więcej niż 60 minut, aż pigment się rozwinie.
