Se o seu computador exibir este erro de solução de problemas de coluna de cromatografia, consulte estas dicas de conserto.
MarylandDependendo da situação, é provável que as saídas de superfície às vezes sejam melhoradas aumentando a quantidade atual de bandejas de coluna, usando menos encaixe ou aumentando o comprimento da coluna. As desvantagens associadas a essas abordagens são problemas operacionais mais complexos, bem como tempos de separação mais longos para produtos mais longos.Mary End
Como identificar, isolar e corrigir os problemas mais comuns
Embora o desenvolvimento relacionado aos métodos HPLC-HPLC tenha melhorado com o avanço da tecnologia de coluna e instrumento, os problemas continuam a começar. Neste guia, oferecemos às famílias uma maneira organizada de isolar, identificar e corrigir muitos problemas diários de HPLC.
As tarefas importantes de um sistema HPLC são as mesmas, quer você use um sistema muito modular, além de um mais complicado. dispositivo. Qualquer solicitação pode causar problemas que perturbam o desempenho geral do sistema. Vários assuntos são frequentemente discutidos aqui. As soluções para essas reclamações são apresentadas em tabelas de fácil utilização.
Identificando problemas de HPLC
Quais são os guias de solução de problemas para cromatografia de combustível?
Reduza o fluxo para uma pequena quantidade acima do ideal. Taxa de fluxo da coluna muito baixa. Aumente o fluxo apenas um pouco acima do ideal. Fluxo fracionário muito baixo com injeção de peças. Desempenho de coluna deteriorado. Teste a coluna dentro da nova taxa de fluxo ideal. Injetor sujo. Limpe e substitua o revestimento. Uma fase estacionária que pode ter acabado de se acumular na saída. Remova nossos dois últimos anéis da postagem.
Problemas podem muito bem ocorrer em muitos lugares no arranjo de HPLC. Isole primeiro o problema de definição e, a seguir, identifique a origem real.
Use a Tabela 1 para determinar quais componentes geralmente podem estar causando o problema. Eliminá-los geralmente revela recursos e resolve a natureza do problema.
Como evitar problemas na fase móvel
Baixa sensibilidade e, além disso, linhas de base crescentes, ruído e, possivelmente, picos em alguns dos cromatogramas podem frequentemente ser atribuídos à passada móvel. Os contaminantes na fase móvel causam problemas especiais de eluição do declive. A linha de base pode aumentar e como sendo falsos picos podem aparecer conforme o nível do componente contaminado aumenta.
A água é a fonte mais comum de poluição que pode ser eliminada com a pesquisa de fase. Para a produção de fases móveis, utilize simplesmente água destilada ou desmineralizada de muito boa limpeza. No entanto, alguns deionizantes comuns liberam poluentes orgânicos na água. Para remover essas impurezas, passe água desmineralizada na casa por meio de carvão ativado ou coluna preparativa C18.
Use apenas solventes de HPLC, sais, reagentes iônicos, modificadores on e modificadores alcalinos e ácidos. A limpeza com solventes de qualidade inferior é demorada, mas geralmente deixa vestígios de impurezas. Esses traços de infecção podem causar problemas se você estiver usando o detector certo que é hipersensível a UV ou fluorescência muito uniforme.
As doenças de deterioração são aparência de pico pobre, separação junto com picos, saliências, perda de resolução, tempos de retenção encurtados e alta contrapressão. Esses sintomas indicam quais contaminantes se acumularam em nossa própria frita e até mesmo na entrada da coluna, ou que existem vazios, tubos ou depressões na camada de empacotamento.
Uma vez que um bom número de tampões de água promove o crescimento de bactérias ou algas, uma pessoa deve preparar essas soluções frescas para o jantar e até mesmo filtrá-las antes de beber (0,2 mícron ou alternativamente Filtro de 0,45 mícron). A filtragem também remove partículas que realmente criarão uma linha de base com ruído ou geralmente bloquearão uma coluna. Evite o crescimento microbiano adicionando quase US $ 100 de azida de sódio aos tampões aquosos. Alternativamente, esses tampões também podem ser misturados a 20% ou mais de solvente orgânico, como etanol e acetonitrila.
O que pode ser algum dicas e truques para cromatografia em coluna?
Aqui, eu apenas compartilho dicas e truques para ajudá-lo a transmitir, resolver alguns problemas comuns de cromatografia em coluna e uma ou duas alternativas rápidas e sujas para o raio completo. Já cobrimos como embalar toda a coluna ideal e como selecionar dispositivos além de possíveis solventes.
Desgrafe essa fase móvel você pode evitar a formação de bolhas no sistema. Em geral, um desgaseificador em linha é definitivamente a primeira preferência, mas a desgaseificação equipada com hélio pode ser uma alternativa caso a fase individual não contenha componentes não padronizados.
Use reagentes de pares iônicos com cuidado. A duração ideal da progressão e a concentração do reagente devem ser determinadas em cada ciclo. As concentrações podem ser de 0,2 milímetros, mais até 150 mM, muitos ou. Geralmente, aumentar a concentração ou o tempo de ciclo aumentará o tempo de retenção. Altas concentrações (> 50%) de acetonitrila ou alguma outra matéria orgânica podem provocar deposição iônica de pares de reagentes. Além disso, um pouco dos íons de sal dos reagentes acoplados pode ser insolúvel em água e pode muito bem precipitar. Evite usar tampões contendo sódio ao chegar a ácidos sulfônicos de cadeia longa (como o sal marinho dodecil sulfato), em vez de tampões contendo potássio.
Modificadores de elementos e ácidos voláteis, como trietilamina (TEA), além do ácido trifluoroacético (TFA), são benéficos em relação aos seus negócios, se você deseja estabelecer um relacionamento. durante uma análise posterior. Esses modificadores também evitam quedas com reagentes de baixo íon. Eles podem ser extras para a tela em concentrações de 0,1 que podem 1,0% TEA ou 0,01 a 0,15% TFA. Aumentar a quantidade pode melhorar a forma do pico quando se trata de mais compostos, mas pode alterar a retenção por tempo suficiente.
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3. Clique em "Reparar" para corrigir quaisquer problemas encontrados
A reciclagem de uma fase móvel específica testada para separação isocrática está se tornando cada vez mais popular para reduzir custos com solvente, reduzir a ponta dos dedos e encurtar o tempo de preparação da fase do smartphone. Solvente A nova máquina de regeneração usa uma válvula móvel controlada por um microprocessador que direciona o fluxo de solvente para que a casa seja destruída quando um pico for detectado. Se a linha de base cair abaixo do limite alto de conta selecionado, o solvente não contaminado é devolvido ao sistema de solventes.
Isolando problemas da bomba
O dispositivo deve fornecer um go ratea constante, favorável para a coluna, em uma variedade de condições. As bombas de HPLC possuem bombas de ar de pistão, seringa ou diafragma, alternativamente simples.
Os problemas com o sistema de bombeamento geralmente não são muito difíceis de combinar com o Spot Correct. Alguns dos sintomas irregulares mais comuns são tempos de retenção, problemas ou picos em um cromatograma. Se a cromatografia for indiscutivelmente inadequada, haverá vazamentos perto dos encaixes ou vedações de envio. Um sinal claro de um vazamento absoluto é o acúmulo de sais, eu diria no bocal da bomba. Os tampões e sais geralmente precisam de tempo para serem eliminados do sistema diariamente por meio de água limpa deionizada. Para isolar e resolver problemas autênticos com seu dispositivo de consumidor, consulte geralmente as seções específicas de solução de problemas e manutenção em seu guia existente. As vedações da bomba devem ser substituídas sistematicamente. Você precisa fazer manutenções regulares, nem sempre totalmente preparado para o problema.
Injetor além dos solventes de injeção
O injetor injeta rapidamente a maior amostra no sistema com interrupção mínima para o psolvente do curso. Atualmente, os artigos de HPLC usam injetores de loop variável, injetores de loop fixo, mas também injetores de seringa. Eles são ativados pessoalmente, pneumaticamente ou possivelmente eletricamente. Problemas
Mecanismos que impactam o injetor (por exemplo, rachaduras, capilares entupidos, vedações) em muitos casos podem ser facilmente identificados e reparados. Use uma coluna segura que você simplesmente filtra para evitar o bloqueio da frita do bico devido à compra física da vedação do bico em particular. Outros problemas, como injeções não reproduzíveis, são mais difíceis de eliminar.
Alturas de pico diferentes, picos divididos e picos amplos podem ser causados por ondas de estrutura incompletas, incompatibilidade do solvente injetado com a fase móvel principal ou baixa solubilidade da amostra. Dissolva a injeção e as amostras no ciclo de transferência, se possível. Caso contrário, certifique-se de que a solução de injeção hipodérmica tem uma força de eluição menor do que o próprio telefone celular humano ( tabela, intervalo 3). Observe que alguns autosMplers usam programas separados de enxágue da agulha. Certifique-se de que a roupa seja adequada para a seleção e mais fraca do que a fase móvel ou de transporte geral. Isso é especialmente importante ao alternar entre a análise normal reversa e a análise de seção.
Embora o filtro de entrada de fase móvel, os filtros do pré-injetor e da coluna de proteção e as pontas de proteção não sejam parte integrante da maioria dos produtos, eles reduzem muito os problemas associados às separações envolvidas. Recomendamos filtrar todas as amostras utilizando filtros de seringa de 0,45 ou 0,2 µm. O uso em postos de proteção é altamente recomendado.
As colunas de proteção dos filtros também evitam a retenção de partículas.
