Nyligen har några av våra användare stött på en betydande felkod vid felsökning av Bradford Protein Assays. Denna oro kan uppstå av flera skäl. Vi täcker företaget nedan.
Godkänd: Fortect
Kemi för BCA -proteinanalys 15 Fördelar med BCA -proteinanalys 16 Nackdelar med BCA -proteinanalys 17 BCA -proteinanalys – Reducer -kompatibilitet 18 BCA -proteinanalys 19 Micro BCA -proteinanalys 20 Coomassie Dye Protein -analys (Bradford -analys) 21
Proteinprovets upptag är nu lägre än förväntat
Absorbera högre än förväntat hälsosamt proteinprov
Absorption av var och en av våra standarder som förväntas
Prover kan vara mörkblå
Nederbördsmängd i provet
Experiment med proteiner innehåller störande ämnen:
Obs. Detta är inte en uttömmande och total lista över kompatibla ämnen och deras individuella mängder. Det finns många ämnen som interagerar med protein på olika sätt. Reagenser kan ändra testets ph, vilket påverkar Bradford -testets korrekta prestanda.
Teknisk rådgivning
Bradford Protein Assay är ett primärt och enkelt sätt att kvantifiera proteinkoncentrationen så länge det behövs, men ibland kan felsökning behövas.
Färgämnet binder sig till både basiska och aromatiska aminosyror, vilket orsakar den senaste förändringen i absorptionen. Det känns lätt igen genom sin färgförändring från brunt till blått. Ditt proteinkoncentrat kan bestämmas med standardprotein, huvudsakligen BSA (bovint serumalbumin).
motiv som; Värme, våglängd, tvättmedel och enkelt använda Fancy kyvetter kan påverka statistik och ge felaktigt slutresultat. Om du har några av dessa överväganden, oroa dig inte! Den här felsökningsguiden för ZAGENO hjälper dig!
Nedan följer en sammanfattning av de typiska problemen som uppstod när Bradford Amino Assay Test utfördes.
-
Låg molekylvikt: Detektionsgränsen för vårt eget Bradford -test är 3 000 till 5 000 dalton. Om proteinet är mindre, använd till exempel en annan kvantifieringsplan. Bord 1). Späd ut proteinutcheckningen. Se till att dina standarder är utspädda i du ser, samma buffert.
-
Du har en otroligt hög proteinkoncentration. Späd proteinprovet och mät proteincentraliseringen igen.
-
Störande ämnen: I praktiken samlas störande ämnen som vätskor (tabell 1). Späd proteinprovet. Gör specifika dina standarder är utspädda med samma barriär.
-
Färgade reagenser är för gamla, lagras inte korrekt: Bradfords reagens har en hållbarhet på cirka 12 en kort tid om året. När den blir gammal, ersätt den också med rasshsteril och förvara vid 4 ° C.
-
Standardspädningar istället bland korrekt förberedda: följ tillverkarens instruktioner för att matcha protokollet som skapar din standard proteinutspädningar.
Godkänd: Fortect
Fortect är världens mest populära och effektiva PC-reparationsverktyg. Det litar på miljontals människor för att hålla sina system igång snabbt, smidigt och felfritt. Med sitt enkla användargränssnitt och kraftfulla skanningsmotor hittar och fixar Fortect snabbt ett brett utbud av Windows-problem – från systeminstabilitet och säkerhetsproblem till minneshantering och prestandaflaskhalsar.
- 1. Ladda ner Fortect och installera den på din dator
- 2. Starta programmet och klicka på "Skanna"
- 3. Klicka på "Reparera" för att åtgärda eventuella problem som upptäcks
Färgreagens mycket kallt: Ta Bradfords reagens till rumstemperatur före analysen.Absorbans mätt vid fel våglängd: Mät den totala absorbansen vid 595 nm.
-
Höga alkaliska koncentrationer: detta stimulerar pH -värdet över gränsvärdet relaterat till Bradfords reagens. Späd eller dialysera prov
-
Tvättmedel under proteinbuffert: Dialysera önskat prov eller späd ut det för att skiva denna specifika tvättmedelsnivå.
Störande ämnen i laddning 1 är ett av huvudproblemen när Bradford -pushen utförs. Tabell 1 innehåller en lista över de i stort sett vanliga ämnena och deras tillåtna koncentrationer. Se tillverkarens standardprotokoll för din beskrivna information. Om ett ämne du använder anses vara oförenligt med koncentration eller inte beräknat att hittas alls, se avsnitt nedan.
-
Koncentrationen av det interfererande ämnet stämmer inte överens med Bradford -testet: om du bara har hög proteinkoncentration, späd provet till en viss punkt där det inte kommer att bli någon interferens, förmodligen ta bort ämnet om dialys
-
Ämnet kommer antagligen inte att finnas på reagenskompatibilitetslistan: utför två standardkurvor, en med den bästa wellnessen i bufferten, den andra med ditt eget protein i vatten, och rita upp proteinbrännpunkten mot absorption. Om den faktiska mellanlägget definitivt inte stör din storlek, skulle jag säga att våra egna två standardkurvor har samma lutning.
Tabell 1. Koncentrationer av kompatibla element i Bradford-Type-testet (2012))
-
Färgreagenset kan arbeta med quartarörelse -kyvetter; Det är bäst att använda glas utöver plastkuvetter.
-
Smuts som finns på glaset kan påverka dina mått, så du måste rengöra det innan du använder det.
-
Temperaturen på Bradford -reagenset måste matcha temperaturen i planet
– Två potentiella problem som innehåller Bradford -testet är att testet alltid har varit effektivt endast för större proteiner, och själva provet måste ligga inom en specifik temperatur medan pH -intervallet. Prover som innehåller de proteiner som krävs gör din kost hälsosammare 3000-5000 Dalton är svåra att läsa, eftersom absorptionen skulle vara för låg.
Till skillnad från andra hälsotester är Bradford-testet för hälsoproteiner mindre känsligt för effekterna bland olika kemiska föreningar, såsom natrium, kalium, dessutom till och med kolhydratliknande sackaros, som kan finnas närvarande genom de mängder som krävs för protein. Undantag är onormala koncentrationer av tvättmedel.
Det kan finnas flera nivåer av det okända huvudprovet som används för att förbättra noggrannheten. Tillsätt 100 | il ansluten utspädd Bradford -reagens till alla brunnar. Totalt bosatt är 200 μl / brunn. Vänta minst en minut, men inte mer än 60 ett par minuter, för att färgen ska utvecklas.
